克洛诺菌Cronobacter 原名阪崎肠杆菌Enterobacter sakazakii，是一种革兰氏阴性杆菌，能引起婴儿与早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结TM 肠炎。是婴幼儿配方食品的必检项目。Brilliance 阪崎肠杆菌显色琼脂（DFI）已写入食品卫生微生物学检验标准GB/T 4789.40-2008。阪崎肠杆菌在DFI琼脂上呈现鲜艳的蓝绿色菌落，透明的培养基底色，清晰易辨。增菌肉汤含有万古霉素和高浓度的盐离子，强效抑制非目标菌。我们提供检测阪崎肠杆菌的完整解决方案。

Brilliance阪崎肠杆菌显色琼脂（DFI）

用于分离和鉴别食品和乳品中的阪崎肠杆菌属（现称为克洛诺菌）的显色培养基，符合Druggan，Forsythe and Iverson的配方。

Brilliance^TM阪崎肠杆菌显色琼脂（DFI配方）：

配方表：

* 可根据标准需要自行调整配方

使用方法：

称取43.1g的CM1055到1L蒸馏水中，混匀加热沸腾至完全溶解，121℃灭菌15分钟，冷却至50℃，混匀倒平板。

产品描述：

Brilliance阪崎肠杆菌显色琼脂（DFI）是基于α-葡萄糖苷酶的反应原理，通过与培养基中的显色剂 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D吡喃葡萄糖苷的结合来检测出来。存在于阪崎肠杆菌内的α-葡萄糖苷酶水解显色剂底物，在黄色平板上产生蓝绿色菌落。普通变形杆菌也是α-葡萄糖苷酶弱阳性的菌株，也可以产生与阪崎肠杆菌相似的菌落，但是在这种培养基上，变形杆菌属会长成灰色菌落：当培养基里面的铁离子形成硫铁化物时能生产硫氢化物。而脱氧胆酸盐可以抑制大部分革兰氏阳性菌的生长。

阪崎肠杆菌是一种革兰氏阴性的棒状细菌，很少能引起成人的疾病，不过它与早产儿（新生儿）的疾病产生有关。研究表明，新生儿或由其他医学问题的婴儿更容易感染阪崎肠杆菌。大部分报告的病例都是严重的，包括败血症（血液中的细菌），脑膜炎，或坏死性小肠结肠炎（严重的肠道感染）。对于神经系统的损害可能是永久性的，且死亡率据报道高达40-80%。 

阪崎肠杆菌是一种机会主义的病原菌，从少数婴儿奶粉中分离出来。这种有机物的高收缩性给阪崎肠杆菌在干燥环境中提供了更佳的竞争优势，当在奶粉厂中被发现时，从而会提高经过巴氏消毒后成品的感染风险。

最近的检测阪崎肠杆菌的FDA方法是基于黄色色素的生产，源于Muytjens等人开创的方法，样品在水中过夜培养，然后在EE肉汤（CM0317）中增菌，再用VRBGA平板（CM0485）分离阪崎肠杆菌，挑取5个菌落接种到胰蛋白胨大豆琼脂（CM0131）上，培养最多三天，检测黄色菌落，典型的阪崎肠杆菌。但是这种方法不是阪崎肠杆菌的选择性培养方法，EE肉汤和VRGBA会使其他肠杆菌过度生长而压制阪崎肠杆菌的生长，会导致错误的阴性结果。要在VRBGA平板上根据菌落形态分离出阪崎肠杆菌不太可能，因为它与其他肠杆菌的菌落形态相似。

技术要点：

请注意以下方法是唯一的建议使用方法：

Oxoid阪崎肠杆菌显色琼脂可以提高婴儿奶粉和其他食品中阪崎肠杆菌的恢复率，可以替代FDA方法2002中的2种培养基。

1、使用接种环将培养过的EE肉汤接种到阪崎肠杆菌显色琼脂平板上；

2、将平板在35-37℃下培养基24小时，查看蓝绿色菌落；

3、对蓝绿色的可以菌落确认为阪崎肠杆菌，根据其生物化学特性，比如通过一些检测系统，例如Microbact 24E 产品，货号MB1131A或MB1074A。

质控：

阳性对照：Enterobacter sakazakii ATCC®29004    生长良好，蓝绿色菌落；

               Escherichia coli  ATCC®25922         生长良好，稻草色菌落；

阴性对照：Staphylococcus aureus  ATCC®25923    抑制生长。

克洛诺菌筛选肉汤和克洛诺菌显色分离琼脂

筛选肉汤Cronobacter Screening Broth (CSB)是选择性增菌肉汤，与显色琼脂CM1122联用，实现食品中克洛诺菌（以前叫阪崎肠杆菌）的分离和计数。

克洛诺菌筛选肉汤基础 CM1121：

成分表：

*可根据标准需要调整

克洛诺菌显色分离琼脂 CM1122

成分表：

*可根据标准需要调整

产品描述

随着新水平的CEN-ISO方法中关于克洛诺菌检测方法的不断发展，在ISO/TC 34, SC 9Ad hoc group中，解决的问题有检测方法的范围，鉴定的标准，培养基的改进。为适应这些新的需要，Oxoid研发出来新的克洛诺菌筛选肉汤CM1121和显色分离琼脂CM1122。

克洛诺菌筛选肉汤（CSB）是由Iversen等人发明的，配合显色琼脂的使用。它能在进行选择性琼脂培养之前来预判断克洛诺菌阳性的样品，它也时克洛诺菌阴性的样品比其他方法中至少少培养了24小时。这些功能通过蔗糖和pH指示剂溴甲酚紫的加入而实现，克洛诺菌可以发酵蔗糖，在显色琼脂上表现为假阳性的大部分其他肠杆菌则不能发酵蔗糖，然后如果在培养后肉汤中出现黄色或橘黄色（发酵蔗糖的结果），说明可以预判断含克洛诺菌，如果培养后肉汤是紫色的，可以断定样品中没有克洛诺菌。

克洛诺菌显色分离平板（CCI）最早由艾弗森等人于2004年开发优化。X-α-葡萄糖苷浓度的增加会增强弱葡糖苷酶的活性，使颜色反应更明显。硫代硫酸钠和柠檬酸铁铵则可以把产硫化氢的肠杆菌区分出来，它们产生灰色/棕色菌落，而去氧胆酸钠抑制革兰氏阳性菌的生长。

技术要点

1、 根据 ISO 68874, ISO 82615 及相关标准制备样品
2、 将X g样品等量分装与X ml的9倍体积的ISO缓冲蛋白胨溶液（如CM1049）中。
3、 37℃±1℃培养18h±2h
4、 取0.1ml培养液至10ml的CSB培养基中， 41.5°C ± 1°C培养24h ± 2h
5、 如果肉汤呈现紫色，则结果为阴性，不需要继续。如果呈现黄色，则继续第6个步骤
6、 取10µl培养液涂布与CCI琼脂平板上
7、 44°C ± 1°C倒置培养24h ± 2h
8、 挑取1-5个菌落进行鉴定
9、 接种到胰蛋白胨大豆琼脂培养基， 37°C ± 1°C培养18h ± 2h
10、进行必要的生化检测

mLST/万古霉素肉汤和阪崎肠杆菌分离琼脂

用于牛奶和乳制品中克洛诺菌（以前称阪崎肠杆菌）的选择性增菌（使用CM1133和SR0247E），预计分离和计数（使用CM1134），配方符合ISO/TS22964:2006

改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨万古霉素肉汤 CM1133

配方表：

*可根据标准需要调整

阪崎肠杆菌分离琼脂 CM1134

配方表：

*可根据标准需要调整

产品描述

为了对应阪崎肠杆菌的感染问题，由ISO和IDF联合发布牛奶和奶制品中阪崎肠杆菌检测方法，并制定了ISO/TS22964:20063。通过BPW预增菌，再用mLST万古霉素肉汤选择性增菌，以及阪崎肠杆菌分离琼脂。利用糖利用、脱羧酶活性以及黄色素沉着等特性来确定阳性克隆。

mLST万古霉素肉汤CM1133中的高盐浓度限值了其他肠杆菌的生长，万古霉素和月桂基硫酸钠抑制了样品中革兰氏阳性菌的生长， 蛋白胨和乳糖的合适用量使得样品中的克洛诺菌在这些抑制剂的存在下仍然能生长。

与其它肠杆菌不同，阪崎肠杆菌具有α-糖苷酶，以此来指示培养基的显色。阪崎肠杆菌分离琼脂中含有5 - 溴-4 - 氯-3 - 吲哚基α-D-吡喃葡糖苷。Cronobacter能水解显色剂，产生蓝色/绿色菌落。脱氧胆酸钠和结晶紫能够抑制培养基中革兰氏阳性菌的生长。

欧盟已严格规定在婴儿配方奶粉、特殊医疗营养品以及半岁婴儿食品中阪崎肠杆菌的含量，并已立法。此规定规定市场中的产品，在保质期内，生产商必须保证抽查的样品按照ISO/TS 22964:20063中规定的方法检测不含阪崎肠杆菌。

技术要点

请参考相关标准方法的详细说明，一下方法是ISO/TS 22964:20063的部分摘要
1、 根据ISO 68875, ISO 82616或者相关标准准备测试样品。
2、 将Xg样品等量分装与9Xml缓冲蛋白水溶液ISO（CM1049）中。
3、 37℃±1℃培养18h±2h
4、 取0.1ml富集液加入10mlMLST/万古霉素肉汤（CM1133&SRO247）中。
5、 44℃±0.5℃培养24h±2h
6、 取10µl溶液接种到阪崎肠杆菌的分离琼脂平板上（CM1134），倒置培养，44℃±1℃，24h±2h
7、 选取1-5个蓝色/绿色菌落
8、 将菌落接种到胰蛋白胨大豆琼脂平板上，37℃±1℃18h-24h培养，观察是否有黄色沉淀
9、 进行必要的生化试验确认

更多该产品信息请见Oxoid网页